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HCP免疫測定
宿主細(xì)胞蛋白（HCP）構(gòu)成了使用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的生物藥物中與過程相關(guān)的主要雜質(zhì)。HCPs是在重組生物藥物表達(dá)過程中無意中產(chǎn)生的，如從宿主細(xì)胞中分泌，由于細(xì)胞應(yīng)激以及在生物過程制造過程中細(xì)胞裂解引起的異常細(xì)胞運輸所致。CHO細(xì)胞可產(chǎn)生70％以上的生物原料藥，但 大腸桿菌， 巴斯德畢赤酵母， HEK 293細(xì)胞和HEK 293細(xì)胞也是常見的表達(dá)平臺。無論使用哪種電池類型，HCP都是與工藝相關(guān)的主要雜質(zhì)。由于宿主細(xì)胞蛋白（HCP）可能給患者帶來風(fēng)險并影響藥物的功效和穩(wěn)定性，因此必須設(shè)計生物制藥純化工藝以去除盡可能多的HCP。申請IND（研究用新藥）時需要HCP清除，以降低臨床試驗的風(fēng)險。
健壯且具有廣泛反應(yīng)性的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是監(jiān)測純化過程一致性以及最終原料藥純度的關(guān)鍵工具，是HCP產(chǎn)品監(jiān)測和釋放測試的金標(biāo)準(zhǔn)方法。HCP ELISA可以在mg / ml水平的產(chǎn)品蛋白質(zhì)存在的情況下測量ng / ml水平的HCP，不需要專門的技術(shù)來運行，并且很容易在整個組織中從過程開發(fā)到制造質(zhì)量控制組轉(zhuǎn)移。
“免疫測定方法依賴于能夠盡可能廣泛地識別進(jìn)入下游純化過程的HCP群體的抗體；因此，用多克隆抗體設(shè)計的夾心免疫測定是HCP監(jiān)測和定量的主要手段。這種測定形式提供了高靈敏度，特異性，通量，自動化潛力，快速周轉(zhuǎn)，定量結(jié)果和每次測定的低成本的組合，這是任何其他當(dāng)前可用的測定技術(shù)所。” – USP第1132章，3。HCP免疫測定方法
同時，HCP ELISA需要高水平的專業(yè)知識才能開發(fā)出具有廣泛反應(yīng)性的HCP抗體，然后將其轉(zhuǎn)變?yōu)闇?zhǔn)確，靈敏，特異且穩(wěn)定的分析方法。此外，ELISA無法提供有關(guān)最終藥物中存在的單個HCP的信息，正在識別哪些HCP或測定是否具有廣泛的反應(yīng)性。
世界各地的監(jiān)管機構(gòu)已采取措施，確保發(fā)起人使用的HCP ELISA適合監(jiān)測純化過程的一致性和產(chǎn)品批次的釋放。建議采用 正交方法， 例如抗體親和提?。?/span>AAE™）免疫親和色譜結(jié)合2D-PAGE和/或 質(zhì)譜（MS） 方法來證明抗體對單個HCP的覆蓋率，以支持HCP ELISA適用于目的。同樣重要的是使分析的稀釋度線性，準(zhǔn)確性和精密度合格。
Cygnus提供 用于21種不同細(xì)胞系的通用 HCP ELISA試劑盒，*的 正交抗體覆蓋分析服務(wù)， 通過AAE-MS™在過程樣品和藥物中進(jìn)行 HCP鑒定，通用 化驗鑒定服務(wù) 以及特定于過程的抗體和化驗開發(fā)服務(wù)的專業(yè)知識 。
Cygnus的質(zhì)量聲譽已得到業(yè)界和全球監(jiān)管機構(gòu)的認(rèn)可，并提供了多種通用的HCP ELISA試劑盒來支持上市的生物制劑。Cygnus的專有技術(shù)還被用于為許多全球生物制藥公司開發(fā)100多種特定于過程的抗體和免疫測定法。
[1] Durocher，V.等。生物技術(shù)雜志。2017年
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